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为什么要使用同种型对照抗体

2018-06-26

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精确的实验设计是药物研发的关键。同型对照抗体的设计可优化治疗性抗体研究中的研究表现和数据分析。

什么是同型对照抗体?

同型对照抗体是用于抗体药物作用和体内/体外单克隆抗体(mAb)研究的阴性对照。同型对照符合测试/一抗特征,但是在针对常见的临床前药物研发中尚未发现;这意味着同型对照对靶抗原缺乏特异性。

在体内和体外测定中,信号可能来自各种结合情况。为了准确解释检测结果,区分结合情况至关重要,例如:

  • 抗原依赖性特结合mAb
  • 由于与Fc受体(FcR)或其他蛋白相互作用,非抗原依赖性结合mAb

同型对照抗体为mAb功能研究提供了理想的阴性对照,使研究人员能够准确区分非特异性背景和特异性抗体信号。

为什么使用同型对照抗体?

通常,抗体在结构上彼此非常相似。抗体分子大部分是“恒定区”,其中相同同型的抗体有一样的氨基酸序列。该恒定区通过与FcR结合有助于介导抗体作用机制(MOA)。mAb中的一个小的高变区实际上决定了抗原特异性结合和预期的治疗效果。

在临床前测试抗体时,需要控制每一个可能影响研究结果的变量。MOA介导和免疫细胞通过恒定区和Fc区可能对mAb功效产生影响。在研究设计中需要考虑这些因素。

使用对应的同型阴性对照(具有与测试/初级mAb相同的宿主种类,具有相同的种型、偶联物、轻链和浓度)可以解释这些添加的变量并且能够进行更精确的数据分析。PBS等简单的阴性对照不能产生相同的效果,与试验品相比可能数据出错。

同型对照对药物研发有什么重要作用?

同型控制模拟广泛的FcR功能

在体内药效测定中需要同型对照抗体以模拟经由测试抗体的Fc区发生的广泛的FcR功能。这种接触仅在与同型对照相比时才能进行适当的分析。

例如,当在免疫肿瘤学研究中测试mAb体内效力时,可以根据同种型对照或PBS是否用作阴性对照来计算不同程度的肿瘤生长抑制(TGI)。因此,测试抗体的比较需要针对同型对照以确保抗体效果评估准确。

当与阴性对照(同型对照和PBS)比较时,可以观察到肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的变化。这些变化的程度随模型而改变,使得在研究设计期间难以预期效果。因此使用适当的对照对免疫分析和下游结果分析非常重要。

在流式细胞术实验中,同型对照可模拟FcR或其他蛋白非特异性结合和染色

在流式细胞术实验中,测试抗体可通过与FcR或其他蛋白结合而引起非特异性染色。由于不同组织类型的FcR表达不同,非特异性染色可能会非常特异,混淆您的研究结果。匹配的同型对照可以模拟这种非特异性结合和染色,与使用PBS(不结合)相比,能够更精确的分析。

在流式细胞术实验的匹配同型对照抗体在技术上有点挑战。所有同型对照对照分子应在使用前充分表征以避免产生误导性结果。阴性对照应该匹配:

  • 种类
  • 重链
  • 轻链
  • FcR

由于这种复杂性,在流式细胞术实验中使用的同型对照常常存在一些争论。

同型对照是免疫组化实验中的重要阴性对照

除了体内研究外,还能作为免疫组织化学(IHC)等检测的阴性对照。当一抗浓度和同型相匹配时,同型对照是最理想的阴性对照。

直接进行二抗染色或用与原代相同物种的多克隆进行染色。然而,两者都不可能匹配组织中的一抗同型或复制一抗结合模式以及同型对照抗体。

如果仅染色两次,则会发生抗体直接结合的风险,而不是与同型对照物结合。单独的二抗不会与一抗结合,因此它可以改变与抗原无关的结合特性。由于与FcR(因不同组织类型而异)相互作用,二抗同型也可以引起明显的染色差异。

作为阴性对照的多克隆染色带来了一些问题。这引入了免疫球蛋白的混合物,它可以结合不同的靶标、扩大范围以及非特异性染色。

结语

同型对照抗体为精确的数据分析提供理想的阴性对照。与PBS这样比较简单的阴性对照不同,选择同型对照将提供一系列的功能和特性。

Topics: Oncology

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