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多囊性肾病

ADPKC的囊肿肿胀试验

提供小鼠和人类模型

冠科生物为常染色体显性多囊肾病(ADPKD)提供独特的高信息量筛选平台。384孔板3D检测格式能够通过稳健的功能读数再现体内疾病表型。

用于模拟ADPKD的小鼠细胞系

  • 小鼠Pkd1-/-集合管细胞在3D培养中发育成囊肿
  • cAMP依赖性囊肿由毛喉素或前列腺素E2诱导
  • 添加测试化合物并测定对囊肿肿胀的影响。
  • 这种稳健的模型适用于高通量筛选,还可以对治疗效果进行详细的表型分析,以及区分疗效和毒性。

ADPKD患者衍生的离体培养物

这种离体检测使用从PKD患者的肾切除组织中收集的材料。这些组织在3D环境中培养会形成囊肿。

培养物在低传代时进行生物库保存,用于随后的化合物测试。囊肿肿胀可由添加去氨加压素或毛喉素等激动剂引起。

可以获得有关这些组织突变状态的信息

稳健的功能读数

Pkd1-/-小鼠集合管细胞在3D中培养。4天后,将培养物暴露于毛喉素和参考化合物72小时。将它们抑制包囊肿胀的能力与溶剂对照(0.2% DMSO)和仅兴奋剂对照(毛喉素)进行比较。


将从ADPKD患者处获得的细胞以3D方式接种在384孔板中。24小时后,将培养物暴露于含有参考化合物的刺激剂中48小时。左:毛喉素(蓝色)或去氨加压素(粉红色)联合托伐普坦(数据未标准化)。右:将参考化合物与阳性对照(仅溶剂)和阴性对照(仅去氨加压素 (ddAVP)或仅毛喉素)比较它们抑制囊肿肿胀的能力。数据标准化为仅溶剂(0%)和去氨加压素(ddAVP)(100%)

鉴别抑制囊肿肿胀与毒性

通过分析与抑制囊肿肿胀以及细胞和核毒性相关的多种形态特征,可以区分具有高治疗潜力的化合物(绿色箭头)和那些与不良毒性反应相关的化合物(红色箭头)

测定原理

主要优势

  • 通过3D成像进行高信息量的表型评估
  • 具有灵敏而稳健的功能读数
  • 将毒化合物与有效化合物分离
  • 从体外到体内的最佳转换
  • 易于扩展的检测方法

进行预培养后,细胞被接种到384孔板的细胞外基质中,在那里它们自发形成包囊。这个过程通常需要1-4天,然后通过添加诱导肿胀的化合物如加压素或毛喉素来刺激囊肿肿胀。同时处理并抑制肿胀,时间为48-72h。

可以调整设置以适应不同的研究问题

 

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